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來(lái)源：生物世界
由單純皰疹病毒1型（HSV-1）感染引起的單純皰疹病毒性角膜炎（HSK）是世界范圍內(nèi)單側(cè)角膜失明的主要原因。據(jù)估計(jì)，每年有150萬(wàn)例HSK病例發(fā)生，其中4萬(wàn)例發(fā)展為嚴(yán)重視力障礙。三叉神經(jīng)節(jié)（TG）是HSV-1在原發(fā)性急性角膜感染后在宿主中建立終生潛伏的地方，TG神經(jīng)元中潛伏的HSV-1會(huì)重新激活導(dǎo)致反復(fù)感染。
2021年5月，復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院洪佳旭主任醫(yī)師和上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院蔡宇伽研究員開(kāi)發(fā)了名為HELP的瞬時(shí)靶向基因編輯技術(shù)實(shí)現(xiàn)了小鼠病毒性角膜炎的完全治愈。HELP技術(shù)使用類病毒載體（VLP），以mRNA的形式遞送CRISPR-Cas9基因編輯工具，使得Cas9酶在體內(nèi)停留時(shí)間很短，可更大程度地降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)、減少免疫反應(yīng)。并將該技術(shù)推進(jìn)到了臨床試驗(yàn)階段。
2023年8月31日，洪佳旭主任醫(yī)師、蔡宇伽研究員作為共同通訊作者，在 Molecular Therapy 期刊上發(fā)表了題為：In Vivo CRISPR Gene Editing in Patients with Herpes Stromal Keratitis 的研究論文。
該研究對(duì)3名伴有急性角膜穿孔的嚴(yán)重難治性單純皰疹病毒性角膜炎（HSK）患者進(jìn)行了HELP治療聯(lián)合角膜移植，并進(jìn)行了平均18個(gè)月的隨訪。結(jié)果顯示，3名患者的未發(fā)生HSV-1復(fù)發(fā)，且沒(méi)有檢測(cè)到CRISPR誘導(dǎo)的脫靶效應(yīng)，也未出現(xiàn)全身性不良事件。
這些初步臨床結(jié)果表明，HELP有望成為一種全新的體內(nèi)抗病毒療法，助力體內(nèi)基因編輯治療時(shí)代的真正到來(lái)，為無(wú)藥可治、有藥難治的遺傳性、獲得性及感染性疾病的患者帶來(lái)新的希望。
在此前的研究中，蔡宇伽和洪佳旭研究團(tuán)隊(duì)使用HELP技術(shù)進(jìn)行了治療病毒性角膜炎的臨床前研究，在急性和復(fù)發(fā)感染的小鼠模型中實(shí)現(xiàn)了從角膜到三叉神經(jīng)節(jié)的逆行運(yùn)輸，將潛藏在神經(jīng)節(jié)的HSV-1病毒庫(kù)清除。
體內(nèi)CRISPR基因編輯治療具有巨大的臨床潛力，但其安全性和療效仍在很大程度上是未知的。在這項(xiàng)研究中，研究團(tuán)隊(duì)在角膜移植術(shù)中對(duì)3例伴有急性角膜穿孔的嚴(yán)重難治性單純皰疹病毒性角膜炎（HSK）患者的角膜注射了HELP療法。這是一項(xiàng)在單中心開(kāi)展的調(diào)查性、開(kāi)放標(biāo)簽、單組、非隨機(jī)干預(yù)性試驗(yàn)（NCT04560790）。
3名患者在HELP治療后停止了抗病毒治療，并進(jìn)行了平均18個(gè)月的隨訪，在末次隨訪時(shí)，他們的角膜移植物和淚液拭子均未見(jiàn)HSV-1病毒復(fù)發(fā)。
此外，研究團(tuán)隊(duì)使用全基因組無(wú)偏雙鏈斷裂點(diǎn)測(cè)序（GUIDE-seq）檢測(cè)了全基因水平的CRISPR-Cas9系統(tǒng)脫靶情況，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)由CRISPR-Cas9誘導(dǎo)的脫靶DNA斷裂。進(jìn)一步檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)注射HELP誘導(dǎo)的載體特異性免疫應(yīng)答，也未發(fā)現(xiàn)其他全身性不良事件。
接受治療的HSK患者的主要臨床結(jié)局
這些初步臨床結(jié)果表明，HELP可能是限制人類角膜中HSV-1復(fù)制的有效策略，且無(wú)明顯的CRISPR相關(guān)副作用，具有可接受的安全性。該療法在未來(lái)還有望將治療范圍擴(kuò)大到較輕的單純皰疹病毒性角膜炎（HSK）患者，以防止他們發(fā)展為難治性HSK以及發(fā)生角膜穿孔并發(fā)癥?？偟膩?lái)說(shuō)，這項(xiàng)研究為體內(nèi)CRISPR基因編輯作為潛在的抗病毒策略提供了臨床概念驗(yàn)證。
復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院魏安基、翟子萌，上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院尹笛，本導(dǎo)基因凌思凱為論文共同第一作者，復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院洪佳旭主任醫(yī)師和上海交通大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究院蔡宇伽研究員為論文通訊作者。該項(xiàng)目獲得了科技部重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目、上海市醫(yī)學(xué)創(chuàng)新研究專項(xiàng)、復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院“十四五”學(xué)科高質(zhì)量發(fā)展專項(xiàng)支持。
論文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2023.08.021